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Anzahl Durchsuchen:0 Autor:Site Editor veröffentlichen Zeit: 2022-07-09 Herkunft:Powered
Traubenkernextraktist eine Art von Polyphenolen, die aus Traubensamen extrahiert werden und hauptsächlich aus Procyanidinen, Katechinen, Epicatechinen, Gallussäure, Epicatechin -Gallat und anderen Polyphenolen bestehen.
Bate Smith -Methode
Diese Methode bestimmt die Proanthocyanidine im Traubensamenextrakt und ihr Inhalt wird durch den Proanthocyanidins -Index ausgedrückt. Da es keinen Standard für Proanthocyanidine gibt, bestimmt diese Methode nur den relativen Wert von Proanthocyanidinen im Traubensamenextrakt.
Prinzip
Procyanidine werden durch Erhitzen unter sauren Bedingungen in rote Anthocyane umgewandelt.
Arbeitsanweisungen
Wiegen Sie eine angemessene Menge an Traubensamenextrakt (ca. 15 ~ 40 mg) und lösen Sie ihn in Methanol auf und lösen Sie ihn schließlich in 100 ml auf. Nehmen Sie 1 ml Probenlösung davon und fügen Sie sie zu einem 10 ml kolorimetrischen Rohr hinzu. Fügen Sie dann 6 ml Salzsäure-N-Butanol-Lösung (5/95, v/v) hinzu, reagieren Sie für 40 Minuten bei 97 ° C, nehmen Sie es aus und kühlen Sie es schnell ab. Messen Sie seine Absorption bei 550 nm und verwenden Sie Methanol anstelle der Extraktlösung als Blank.
Proanthocyanidin Index = A × 7,0/W。 A: Absorption; W: Probenmasse (g).
Der Proanthocyanidin -Index des Traubensamenextrakts, der mit der Bate Smith -Methode gemessen wird, liegt im Allgemeinen zwischen 80 und 100 und manchmal kann es größer als 100 sein.
Porter -Methode
Weil die Reproduzierbarkeit der Bate Smith -Methode sehr schlecht ist und die Reaktion von Procyanidinen unter diesem Zustand nicht sehr gründlich ist. Daher haben Porter et al. Verbesserte die Bate Smith -Methode. Die Verbesserung der Porter -Methode besteht hauptsächlich darin, dem Reagenz Fe3+ hinzuzufügen, um den Reaktionsgrad und die Farbstabilität zu verbessern. Diese Methode bestimmt auch den relativen Inhalt von Procyanidinen und die Ergebnisse werden in PVU (Portal Value Unit) ausgedrückt. Das Prinzip der Porter -Methode ist das gleiche wie das der Bate Smith -Methode.
Arbeitsanweisungen
Wiegen Sie eine angemessene Menge an Traubensamenextrakt (ca. 10 ~ 30 mg) und lösen Sie ihn in Methanol auf und lösen Sie ihn schließlich in 100 ml auf. Nehmen Sie 1 ml Probenlösung daraus und geben Sie sie zu einem 10 ml kolorimetrischen Rohr und fügen Sie dann 6 ml Salzsäure - N -Butanol (5/95, v/v), 0,2 ml 2,0% Ammonium -Eisensulfatlösung (gelöst mit 2 mol.L. -1 Hydrochlorsäure), reagieren 40 min bei 97 ℃, nehmen Sie sie heraus und kühlen Sie sie schnell ab, messen Sie seine Absorption bei 550 nm und ersetzen Sie die Extraktlösung durch Methylalkohol als Blank.
PVU = A × 7,2/W。 A: Absorption; W: Probenmasse (g).
Das Bewertungsausschuss der amerikanischen Traubensamenmethode ist der Ansicht, dass die PVU des Traubensamenextrakts zwischen 250 und liegt
350. PVU ist zu niedrig, was darauf hinweist, dass der Gehalt an Proanthocyanidinen in diesem Produkt niedrig ist. PVU ist zu hoch, was darauf hinweist, dass der Gehalt an hohen Polymer -Procyanidinen im Produkt hoch ist. Die Porter -Methode kann jedoch nicht unterscheiden, welche Proanthocyanidine nachgewiesen werden. Wenn die PVU eines Traubensamenextrakts 300 beträgt, kann das Produkt möglicherweise mehr oligomere Proanthocyanidine oder mehr Monomer- und Hochpolymer -Proanthocyanidine haben.
Das Evaluierungsausschuss der amerikanischen Traubensamenmethode ist der Ansicht, dass die oben genannten zwei Methoden nicht für die quantitative Analyse von Gesamtpolyphenolen oder Proanthocyanidinen in Traubensamenextrakten verwendet werden können.
Folin Ciocalteau -Methode
Der Gehalt an Gesamtpolyphenole im Traubensamenextrakt wird nach dieser Methode bestimmt, und Gallussäure wird im Allgemeinen als Referenzsubstanz verwendet. Der Vorteil dieser Methode besteht darin, dass sie den Gehalt der gesamten Polyphenole im Extrakt quantitativ analysieren kann. Der Nachteil ist, dass es die Arten von Polyphenolen nicht unterscheiden kann (z. B. ob die Bestimmung Monomer oder Polymer ist); Darüber hinaus beteiligen sich Proteine, Nukleinsäuren, Ascorbinsäure und andere leicht oxidierte Substanzen auch an dieser Reaktion, und es ist unmöglich zu unterscheiden, ob Traubensamenextrakt verfälscht wird. Da die Faktoren der Reaktion von Monomer und Proanthocyanidinen unterschiedlich sind, besteht eine gewisse Abweichung zwischen dem gemessenen Gehalt und dem realen Gehalt im Traubensamenextrakt.
Prinzip
In alkalischer Lösung können Phenolverbindungen Wolfram -Molybdsäure (W6+ in W5+) reduzieren, um blaue Verbindungen zu produzieren. Die Farbtiefe korreliert positiv mit dem Gehalt von Polyphenolen. Blaue Verbindungen haben den maximalen Absorptionspeak bei 760 nm.
Arbeitsanweisungen
Wiegen Sie eine angemessene Menge an Traubensamenextrakt, lösen Sie ihn mit Wasser auf und die Konzentration beträgt etwa 0,1 mg/ml. Nehmen Sie 1 ml Probenlösung und fügen Sie sie zu einem 10 ml kolorimetrischen Röhrchen hinzu, fügen Sie dann 1 ml entionisiertes Wasser, 0,5 ml Folin Ciocalteau -Reagenz und 1,5 ml 26,7% Na2Co3 -Lösung nacheinander hinzu, reparieren Sie schließlich das Volumen mit Wasser auf 10 ml, reagieren Sie im Raum im Raum reagiert im Raum reagieren Temperatur für 2 Stunden und messen Sie seine Absorption bei 760 nm.
Nehmen Sie Gallussäure als Referenzsubstanz, bereiten Sie Lösungen mit unterschiedlichen Konzentrationen vor, reagieren nach der obigen Methode und messen Sie die Absorption. Zeichnen Sie eine Standardkurve mit Absorption gegenüber der Konzentration. Der Gehalt an Gesamtpolyphenole im Extrakt kann aus der Standardkurve (ausgedrückt als Gehalt, das Gallussäure entspricht) erhalten werden. Das Evaluierungsausschuss der amerikanischen Traubensamenmethode stimmte zu, diese Methode zu verwenden, um die gesamten Polyphenole im Traubensamenextrakt zu bestimmen, schlug jedoch vor, dass diese Methode weiter verbessert werden sollte, um den Unterschied zwischen der Reaktion von Monomer und Proanthocyanidinen mit Folin Ciocalteau -Reagenz zu bestätigen.
Vanillin -Erkennungsmethode
Diese Methode wird verwendet, um den Gehalt von Flavan-3-ol im Traubensamenextrakt zu bestimmen, kann jedoch nicht zwischen Monomeren und Polymeren unterscheiden. Catechin wird im Allgemeinen als Standard für die quantitative Bestimmung verwendet.
Prinzip
Unter sauren Bedingungen haben Phloroglucinol, Resorcinol, Flavanol eines Rings und Poly (Procyanidine a Ring) eine hohe chemische Aktivität. Phloroglucinol oder Resorcinol können mit Vanillin kondensieren, und das Produkt bildet farbige positive Kohlenstoffionen unter der Wirkung von Säure. Die Konzentration der Probe ist positiv mit der erzeugten Farbe korreliert.
Arbeitsanweisungen
Wiegen Sie eine angemessene Menge an Traubensamenextrakt und lösen Sie ihn mit einem bestimmten Volumen Methanol auf. Schließlich beträgt die Konzentration der Lösung der Traubensamenextrakt etwa 0,1 mg/ml. Fügen Sie 1 ml Probenlösung zum 10 ml kolorimetrischen Röhrchen hinzu und fügen Sie dann nacheinander 2,5 ml Vanillin -Methanol -Lösung (1,0% W/V) und 2,5 ml 25% ige Schwefelsäure -Methanollösung hinzu. Reagieren Sie 15 Minuten bei Raumtemperatur und messen Sie seine Absorption bei 510 nm.
Nehmen Sie Catechin als Referenzsubstanz, bereiten Sie Lösungen mit unterschiedlichen Konzentrationen vor, reagieren nach der obigen Methode, messen Sie die Absorption und zeichnen Sie die Standardkurve mit der Absorption der Konzentration. Der Gehalt an Flavan-3-Alkohol im Extrakt kann aus der Standardkurve erhalten werden.
Die Vanillin-Nachweismethode zur Bestimmung von Flavan-3-ol im Traubensamenextrakt besteht im Allgemeinen darin, den Extrakt mit Methanol aufzulösen und Reagenzien herzustellen. Darüber hinaus kann Gletscherlesensäure auch verwendet werden, um den Extrakt aufzulösen und Reagenzien herzustellen, aber die gemessenen Daten der beiden sind sehr unterschiedlich. Wenn Methanol als Lösungsmittel verwendet wird, misst die Vanillin-Methode die Menge des gesamten Flavan-3-Alkohols, was für die Menge aller Flavan-3-Alkohol in polymerisierten Procyanidinen auftreten kann. Wenn Glacial Essigsäure als Lösungsmittel verwendet wird, misst die Vanillin-Methode die Menge an Monomer-Flavan-3-Alkohol und polymerisierten proanthocyanidinen terminalen Flavan-3-Alkohol, während der Flavan-3-Alkohol in der Mitte des polymerisierten proanthocyanidins nicht gemessen werden kann. Methanol wird hauptsächlich als Lösungsmittel verwendet, um die Menge an Flavan-3-ol im Traubensamenextrakt zu bestimmen. Der durchschnittliche Polymerisationsgrad von Proanthocyanidinen im Extrakt kann bei gleichzeitig zwei Lösungsmitteln in etwa gemessen werden.
Das Evaluierungsausschuss der amerikanischen Traubensamenmethode hat sich bereit erklärt, diese Methode nicht zu verwenden, um die Wirkstoffe im Traubensamenextrakt zu erkennen.
HPLC -Methode
Diese Methode bestimmt den Inhalt jedes Monomers, Oligomers und Homopolymers im Extrakt. Aufgrund der Einschränkungen von Referenzsubstanzen und analytischen Methoden können jedoch nur der Inhalt von Monomeren und einigen Oligomeren im Traubensamenextrakt bestimmt werden. In der praktischen Anwendung ist es nur erforderlich, den Monomerinhalt zu bestimmen. Die Hauptmonomere im Traubensamenextrakt sind Catechin, Epicatechin, Gallussäure, Epicatechin -Gallat.
Der Gehalt an Monomeren im Traubensamenextrakt beträgt im Allgemeinen etwa 10,0%und bis zu 30,0%. Aufgrund der Komplexität der Komponenten des Traubensamenextrakts ist es im Allgemeinen schwierig, eine Vielzahl von Monomeren durch HPLC vollständig zu trennen. Daher muss vor der Injektion der Extrakt vorbehandelt werden, um das hohe Polymer zu entfernen und den Gehalt an Monomer zu verbessern. Zu den gängigen Vorbehandlungsmethoden gehören Kieselgelsäulenchromatographie, Sephadexlh-20, Sephadex G25, Toyopeah TSK HW40 und andere Säulenchromatographie-Methoden. Die Probe kann auch durch Dünnschichtchromatographie vorbehandelt werden, im Allgemeinen unter Verwendung von Toluol: Aceton: Essigsäure = 3: 3: 1 (v/v/v) als Entwicklungsmittel.
